研究背景和目的：循环肿瘤DNA（circulating tumor DNA，ctDNA）携带了与肿瘤细胞一致的遗传学信息，在肿瘤分子诊断中有潜在应用价值。本研究中，我们靶向肿瘤相关基因热点突变，分析HCC患者血浆cfDNA和肿瘤组织DNA中的基因突变，探讨血浆cfDNA作为肿瘤标志物在HCC分子诊断中的临床应用价值。

材料和方法：收集29例原发性肝癌患者的标本，包括术前1天外周血及手术切除的肿瘤组织和癌旁组织。利用扩增子测序技术分析50个常见肿瘤相关基因在血浆cfDNA及肿瘤组织中的突变，将等位基因突变频率（mutant allele frequency，MAF）水平高于1%的基因位点纳入分析，PBMC来源的基因组DNA用于排除正常体细胞的单核苷酸多态性位点。同时分析血浆cfDNA中基因突变状态与患者肿瘤负荷的相关性。

结果：29例患者血浆样本及配对组织样本DNA进行了深度测序，其中1例患者肿瘤组织DNA不足，因此28例患者肿瘤组织DNA得到有效测序数据，共检测到35个突变基因，以TP53、ATM、ALK的突变频率最高，分别是50% (14/28)、39% (11/28)和39% (11/28)，其中27例（96%）肿瘤组织中检测到至少2个突变基因，1例肿瘤组织中未测到突变基因；全部29例（100%）血浆cfDNA中均检测到突变基因。

分析28例患者中配对术前血浆cfDNA和肿瘤组织DNA的突变，发现21例患者血浆cfDNA与肿瘤组织DNA中有一致的突变基因（ctDNA阳性），血浆cfDNA突变检测的敏感性为75%（21/28），其中以TP53、PDGFRA、KIT及NPM1突变频率最高，分别是33%（7/21）、23.8%（5/21）、19%（4/21）及19%（4/21）；另有7例（7/28，25%）患者配对血浆cfDNA中检测到与肿瘤组织DNA中不完全一致的突变基因（ctDNA阴性）。

此外，28例配对组织样本和血浆cfDNA样本的患者中，17例（17/28，61%）患者癌旁组织DNA与肿瘤组织DNA中检测到一致的基因突变，其中14例（14/17，82%）患者血浆cfDNA中检测到与组织一致的突变基因，其中高频突变基因包括PDGFRA、KIT及NPM1等。

分析血浆cfDNA中突变基因与患者临床病理特征的相关性显示，肿瘤直径>5cm组患者中TP53、CTNNB1、PIK3CA及CDKN2A基因的MAF水平较肿瘤直径<5cm组患者中有升高趋势，肿瘤多发或伴随转移组患者中TP53、RET、FGFR3及APC基因的MAF水平较肿瘤单发组患者中显著升高。

结论：扩增子测序技术用于肝癌患者血浆cfDNA中突变基因检测的敏感性较高，血浆ctDNA可能成为肝癌分子诊断的有效分子标志物。